FUNDAMENTO
Un pool de plasmas normales es una mezcla de varios plasmas procedentes de pacientes sanos, que puede ser utilizada como líquido de referencia, ya que las sustancias que contiene están presentes en ella a una concentración comprendida dentro de los límites normales.
En la mayoría de las pruebas de coagulación se utiliza el plasma pobre en plaquetas (PPP) como muestra.
MATERIAL NECESARIO
- Tubos de recogida de sangre con citrato sódico
- Centrifuga
- Pipeta Pasteur
- Vaso de precipitados
- Tubos Eppendorf
- Micropipeta y puntas
- Un rotulador de vidrio de punta fina.
REACTIVOS
Citrato sódico 0,11 M, mezclado con sangre en proporción 1 a 9.
TÉCNICA
1. Centrifugar los tubos de sangre a 3.000 a 3.5000 r.p.m durante 10 minutos
2. Desechar los plasmas hemolizados, hiperlipémicos y hipernilirrubinémicos
3. Extraer rápido los plasmas válidos y depositarlos en un vaso de precipitados
4. Mezclar todos los plasmas para formas el pool PPP
5. Repartir la mezcla en distintos Eppendorf
6. Rotular los Eppendorf con el nombre del producto preparado ( pool de PPP) y fecha de elaboración
7. Proteger al PPP del deterioro, con acciones como el correcto cierre del Eppendorf y almacenarlo a la temperatura correcta ( -20ºC)
RESULTADOS
Utilizamos la sangre de 6 tubos diferentes, las cuales estaban bastante hemolizadas o la cantidad de plasma era muy baja.
CONCLUSIONES
Esta práctica la hemos realizado más de una vez puesto que el primer día el estado de la sangre era muy malo y los resultados no fueron buenos. Para las prácticas realizadas posteriormente era necesario PPP, por lo que al realizar la práctica otro día con muestras diferentes y en mejor estado los resultados fueron los esperados y el PPP estaba en buenas condiciones para usarlo en pruebas de coagulación.
Desde mi punto de vista es una práctica muy sencilla y muy útil, ya que el resultado obtenido en las distintas pruebas de coagulación en las que fue utilizado fue bueno.
TEST DE HOWELL
Es la prueba que mide el tiempo que tarde en coagularse un PRP obtenido a partir de una muestra de sangre anticoagulada con citrato sódico.
FUNDAMENTO
Se vierte el PRP en un tubo de vidrio y se le añade una solución de CaCl hasta que se produzca la coagulacion de este.
MATERIALES Y REACTIVOS
- Rotulador
- Tubos de vidrio
- Baño maría
- Pipetas
- Cronómetros
REACTIVOS:
- Solución salina 0,85% p/v
- Solución cloruro cálcico 0,025 M
- Pool PRP
TÉCNICA
1. Atemperar los reactivos y la muestra, a 37 ºC durante 5 a 15 minutos (baño maría)
2. Rotular un tubo con la letra M (de Muestra) y otro con la letra C (de Control).
3. Introducir los 2 tubos en el baño de agua, ajustado a 37 ºC.
4. Depositar 0,1 ml de muestra, en el tubo M, y 0,1 ml de control comercial o de pool de plasmas, en el tubo C.
5. Añadir 0,1 ml de solución salina al 0,85 % al contenido de cada uno de los tubos.
6. Agregar, a la mezcla anterior, 0,1 ml de CaCl2 0,025 M y, simultáneamente, poner en marcha los cronómetros.
7. Coger los tubos por su extremo superior y, sin sacarlos del baño de agua, inclinarlos suavemente hacia delante y hacia detrás, a un ritmo de una inclinación por segundo.
8. Parar el cronómetro correspondiente, cuando se vea la aparición de un enturbiamiento y de una solidificación de la mezcla de plasma y de reactivos, contenida en cada uno de los tubos.
RESULTADOS
Los valores normales se sitúan entre 90 y 130 segundos
CONCLUSIONES
En esta práctica hubo algunas muestras que no llegaron a coagularse, y otras que lo hicieron pero fuera de los tiempos normales.
Aun así, el procedimiento se realizó bien, el posible factor que hizo que los resultados no fueran los esperados fue el estado de las muestras.
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