PRÁCTICA 6: TINCIÓN DE GIEMSA
Paula Cano Sánchez, grupo C.
1.
FUNDAMENTO
El objetivo de esta práctica es diferenciar los distintos
componentes celulares de una extensión sanguínea mediante el uso de colorantes.
Las tinciones son un conjunto de procesos que conducen a la
coloración de las estructuras que componen las células sanguíneas. Tiene por
objeto aumentar el contraste entre esas estructuras y el medio que las rodea, y
permitir, por tanto, que las células sean visualizadas microscópicamente con
mayor facilidad.
La tinción de Giemsa es un método diferencial de tinción, que se
utiliza para distinguir los distintos componentes celulares, atendiendo a la
distinta afinidad hacia unos colorantes u otros. Esta tinción es de tipo
ROMANOWSKY, es decir, que utiliza azul de metileno y sus productos de oxidación
(azur A, B y C) como colorante básico y se combina con eosina, como colorante
ácido.
2.
MATERIAL
Para la EXTENSIÓN los citados en la práctica 4.
Para la tinción:
|
TUBO DE ENSAYO |
CRISTALIZADOR |
PUENTE DE TINCIÓN |
|
FRASCO LAVADOR |
PIPETA PASTEUR |
CUBREOBJETOS |
|
PORTA OBJETOS |
VASO DE PRECIPITADOS |
MICROSCOPIO |
Reactivos:
-
Colorante
Giemsa
-
Solución
tampón ph 7,2
PREPARACION SOLUCIÓN TAMPÓN 7,2 con Na2HPO4 d=14,2 g/L y KH2PO4
0,1 M d=13,6 g/L. Se necesitan 7 ml y 3 ml respectivamente para preparar 10 ml
solución tampón. Necesitamos para 1 L de solución tampón.
7
ml ------------ 10 ml
X
---------------- 1000 ml x= 700
ml solución disódica Na2HPO4
300 ml restantes de solución monopotasica KH2PO4
14,2 g
--------- 1000 ml 13,6 g ------- 1000 ml
X ----------------- 700 ml x= 9,49 gr Na2HPO4 x ----- 300 ml x=4,08 gr KH2P04
-
Metanol
-
Aceite
de inmersión para observar al microscopio con objetivo 100 X.
3.
TÉCNICA
1º: preparamos una extensión sanguínea o utilizamos una
realizada previamente.
2º: cubrir la preparación con metanol durante 3 minutos.
3º: dejar escurrir y secar al aire
4º: preparamos la disolución que vamos a utilizar a continuación
à 0,2 ml de Eosina Azul de metileno según
Giemsa y diluir en 2 ml de tampón pH 7,2. Homogeneizar.
5º: cubrimos la preparación con esta solución durante 25
minutos.
6º: lavar 2 minutos con solución tampón pH 7,2.
7º: dejar secar al aire la preparación.
8º: observamos la preparación al microscopio.
4.
RESULTADOS
Los eritrocitos se observaran rosa – asalmonado y las plaquetas
violetas.
5. VALORACIÓN, CONCLUSIÓN Y OBSERVACIONES
En esta práctica es muy
importante tanto la calidad de la extensión como respetar los tiempos de
aplicación de cada colorante. El resultado es el indicado por la práctica, por
lo tanto es satisfactorio.
A CONTINUACIÓN ADJUNTO VIDEO DE LA REALIZACIÓN DE AMBAS TINCIONES, EL PROCOLO DE MAY-GRÜNWALD VIENE DETALLADO EN ÉL VÍDEO:
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