PRÁCTICA 3: CENTRIFUGACIÓN. LAVADO DE HEMATÍES Y PREPARADO DE UNA SUSPENSIÓN. HEMATÍES TIPADOS.

 

PRÁCTICA 3: CENTRIFUGACIÓN. LAVADO DE HEMATÍES Y PREPARADO DE UNA SUSPENSIÓN. HEMATÍES TIPADOS.

Paula Cano Sánchez, grupo C.

1.     FUNDAMENTO O PRINCIPIO

El objetivo del lavado de hematíes es eliminar completamente el plasma y la solución conservante y dejar los hematíes resuspendidos en una solución salina isotónica estéril. El lavado se hace por dilución progresiva del sobrenadante con un gran volumen de solución salina.

2.     MATERIAL

Tubos de ensayo                                            Parafilm o tapones

Pipetas pasteur                                              Sangre entera

Gradillas                                                        Suero fisiológico

Vaso de precipitados                                     Papel de filtro

Micropipeta                                                   Puntas de pipeta

3.     TÉCNICA O PROTOCOLO

PARTE 1: LAVADO DE HEMATÍES

1º: a partir de un tubo de ensayo con sangre entera homogénea se extrae 1 ml con una pipeta pasteur o una micropipeta y se deposita en un tubo de ensayo.

2º: en el tubo que contiene el mililitro de sangre que hemos depositado previamente, se añaden 9 ml de suero fisiológico al 0,9% con ayuda de una pipeta pasteur y se cierra el tubo con un tapón o Parafilm.

3º: introducimos nuestro tubo en la centrifuga con un programa de 3500 r.p.m durante 5 minutos.

4º: cuando los hematíes han quedado depositados en el fondo del tubo, desechamos el sobrenadante con ayuda de una pipeta pasteur.

5º: se realiza este proceso hasta que el sobrenadante adquiera un tono transparente.

PARTE 2: SUSPENSION DE HEMATIES AL 2% Y 5%

1º: realizar los cálculos para conocer la cantidad de hematíes que necesitamos y suero fisiológico para realizar la suspensión indicada.

2% à      2---------100

                x---------- 5   x= 0,1 ml de sangre + 4,9 ml de AD (100 µl + 4900 µl AD)

5% à     5 --------- 100

                 X --------- 5  x= 0,25 ml de sangre + 4,75 ml de AD (250 µl sangre + 4750 µl)

2º: añadir las cantidades indicadas en diferentes tubos de ensayo e indicar el porcentaje en cada uno de ellos.

3º: si se desea observar al microscopio se procederá a coger una gota de cada suspensión y depositarla en portas distintos. Así se podrá observar la proporción de hematíes en cada suspensión en correspondencia al porcentaje.

4.     RESULTADOS

Se observan distintas suspensiones de hematíes según el porcentaje a través del cual las hayamos realizado.

5.     

VALORACIÓN, CONCLUSIONES Y OBSERVACIONES.

En esta práctica no tuve ninguna dificultad, los resultados fueron los esperados. Observe las distintas proporciones de hematíes según la suspensión empleada.