PARTE A: HIERRO SÉRICO
1. OBJETIVO
Determinar la sideremia: la cantidad de hierro en sangre, en el plasma, utilizando el espectrofotómetro.
2. FUNDAMENTO
Se trata de un método colorimétrico de la casa Spinreact (se adjunta el protocolo) que utiliza como muestra PLASMA. Primero separa el hierro de la transferrina y a través del ácido ascórbico pasarlo a ión ferroso, que en presencia de Ferrozine forma un complejo coloreado cuya intensidad es proporcional a la concentración de hierro en la muestra.
El procedimiento que seguimos es primero el llenado de las cubetas (utilizar tubos después a cubetas) como se muestra en la tabla. A continuación se mezclan bien y se dejan incubar durante unos 10 minutos para por último medir su absorbancia en el espectrofotómetro. Para realizar los cálculos posteriores es importante saber que la concentración del patrón es de 100 µg/dl.
3. MATERIALES Y REACTIVOS
- Cubetas de espectofotometría
- Micropipetas y puntas
Reactivos:
R1: Tampón Acetato pH 4,9 100mmol/L
R2: Reductor Ácido ascórbico 99,7%
R3: Color FerroZine 40mmol/L
Patrón 100 microg/L
4. TÉCNICA
1. Para preparar el reactivo de trabajo (RT), disolvemos el contenido de un tubo de R2 en el de R1. Lo tapamos y movemos suavemente, hasta disolver el contenido.
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada. A 562 nm se hace la lectura
5. CÁLCULOS
(A) muestra - (A)blanco muestra / (A) patrón x 100 = 0,148 - 0,018 / 0,084 x 100 = 1,54
6. RESULTADOS
Ab = -0.009
Ap = 0,084
Abm = 0,018
Am = 0,148
7. CONCLUSIONES
Esta práctica es sencilla y los resultados fueron buenos en el espectofotometro.
PARTE B: CFTH
1. FUNDAMENTO
La transferrina sérica se satura con un exceso de Fe3+ y el exceso no fijado se elimina por precipitación con carbonato magnésico (quelante), determinándose a continuación la cantidad total de hierro presente. La diferencia entre la capacidad de fijación total de hierro hallada (CFTH) y el hierro sérico inicial (Hb) nos da la capacidad de fijación de hierro no saturado o residual.
2. MATERIALES Y REACTIVOS
TE
Pipetas
Centrifuga
Reactivos:
R 5 Solución Saturante Solución de hierro 500 μg/dL
R 6 Agente Precipitante Magnesio carbonato
REACTIVOS ADICIONALES
El sobrenadante obtenido se procesa como muestra para la determinación del hierro
Muestra: suero o plasma heparinizado
3. TÉCNICA
1. Pipetear en los tubos:
Muestra (mL) 0,5
R 5 Solución
saturante (mL) 1,0
2. Mezclar bien e incubar 10 minutos a Temperatura ambiente (15-25ºC).
3. Añadir a cada tubo:
R 6 Agente precipitante (dosis) 3 (cucharadas que vienen en envase)
4. Mezclar bien e incubar 10 minutos a temperatura ambiente.
5. Centrifugar 15 min. a 3000 r.p.m.
6. Recoger el SOBRENADANTE, cuidadosamente y procesar como una muestra para la determinación de hierro.
4. CÁLCULOS
CFTH = Concentración de hierro en el sobrenadante x 3 (Factor de dilución)
IST (INDICE DE SATURACIÓN DE LA TRANSFERRINA) %:
IST= Hierro sérico x 100/CTFH
5. RESULTADOS
CFTH: 1,48 x 3 = 4,44
IST : 1,54 x 100 / 4,44 = 34,68
6. CONCLUSIONES
En esta práctica no tuvimos ningún problema, los resultados fueron buenos y nos resultó una práctica sencilla.
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