PRÁCTICA 12: TINCIÓN DE RETICULOCITOS
Paula Cano Sánchez, grupo C.
1.
OBJETIVO
Y FUNDAMENTO
Identificar los reticulocitos presentes en una muestra de
sangre, reconocer y observar su aspecto, y ver la relación entre la cantidad
presente de estas células, con respecto a 2000 hematíes.
Los reticulocitos son hematíes inmaduros en los que se observan
restos de ARN. Son teñidos con colorantes como el azul cresil brillante, es una
tinción vital y su coloración es de tono azul.
2.
MATERIALES
Microscopio óptico Baño
de agua
Tubos de hemólisis Portas
Pipetas pasteur
Solución salina 0,9%.
Citrato sódico al 3%. AZUL
CRESIL BRILLANTE
Agua destilada.
Aceite de inmersión.
3.
TÉCNICA
1. Preparar el colorante:
80ml solución salina y 20 ml de citrato sódico. Pesar 1g de azul
de cresil brillante y disolverlo en la mezcla anterior. Filtrar antes de
usarlo.
Tinción de reticulocitos:
1. 4 gotas del colorante en un tubo de hemólisis y otras 4 gotas
de la sangre homogeneizada para una extensión. La misma proporción de los dos.
Pero vamos a hacer uno para todos siempre manteniendo la misma proporción de
uno y otro.
2. Mezclar suavemente y tapar con parafilm, introducir en el
baño maría a 37ºC durante 5 minutos o calentar en cámara de incubación.
3. Pasado el tiempo volver a homogeneizar y tomar una gota de la
suspensión para depositarla en el porta.
4. Hacer una extensión.
5. Dejar secar.
4. RESULTADOS
Con aceite de inmersión observar la extensión al objetivo de
100x. Los hematíes se habrán teñido de color verde amarillento y los
reticulocitos se diferencian por presentar en su interior hilos finos de color
azul.
Se deben contar 2000 hematíes en total (20 campos). Es decir,
tenemos que buscar una zona de la extensión que sea homogénea, y hacemos el
conteo de esos campos. Tiene que haber en un campo: entre 20 y 40 hematies, se
hace para evaluar que no haya mucha concentración y en ese campo después se
mide los reticulocitos.
El cálculo del porcentaje es el siguiente:
Nº reticulocitos contados
% reticulocitos = ----------------------------- x 100
Nº hematíes contados
Para descartar errores en la técnica, se debe realizar por
duplicado, de manera que la diferencia entre ellas sea igual o menor a 5
reticulocitos. El resultado final es la media de los dos porcentajes.
Ejemplo contamos 25 reticulocitos: % reticulocitos = 25/2000 x
100
% reticulocitos = 1,25%
VALORACIÓN
La práctica no salió bien porque en las muestras no fuimos capaces de visualizar ningún reticulocito.
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